Plásmido CRISPR de Activación (h) Pendrin: sc-401272-ACT

El SLC26A4 humano codifica pendrina, un intercambiador de aniones multipaso que transporta cloruro, yoduro, bicarbonato y tiocianato a través de membranas epiteliales. La pendrina contribuye a la homeostasis iónica y del pH en el oído interno, la tiroides y el riñón, conectando los programas de transporte epitelial con el equilibrio sistémico de electrolitos. En la tiroides, la pendrina favorece el eflujo apical de yoduro, importante para su manejo, mientras que en las células intercaladas renales modula el intercambio de bicarbonato y cloruro implicado en la regulación ácido-base. La actividad desregulada de SLC26A4 se asocia con hipoacusia hereditaria y fenotipos relacionados con la tiroides, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudios mecanísticos del transporte epitelial, la biología del desarrollo y las relaciones genotipo–fenotipo.

Pendrin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC26A4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pendrin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC26A4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC26A4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pendrin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC26A4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pendrin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pendrin en células tumorales con expresión de SLC26A4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.