Peg10 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-431278-ACT

Il Peg10 murino (paternally expressed gene 10) codifica una proteina “domesticata” derivata da retrotrasposoni, con caratteristiche simili a Gag e Pol, che sostiene la sopravvivenza cellulare, la proliferazione e la differenziazione specifica di linea. Peg10 è regolato dall’imprinting genomico e contribuisce ai programmi di sviluppo, inclusi la crescita placentare ed embrionale, attraverso il controllo trascrizionale e post-trascrizionale dell’espressione genica. A livello cellulare, Peg10 è stato associato a vie che governano la resistenza all’apoptosi e la proteostasi, e la sua disregolazione è spesso studiata nel contesto della trasformazione oncogena, del rimodellamento tissutale e di segnali di crescita aberranti. Queste proprietà rendono Peg10 un bersaglio rilevante per studiare le reti di geni soggetti a imprinting, la biologia dello sviluppo e i cambiamenti associati alle malattie nei circuiti di regolazione genica.

Peg10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Peg10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Peg10 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Peg10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Peg10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Peg10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Peg10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Peg10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Peg10 nelle cellule tumorali con espressione di Peg10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.