PDZ-RhoGEF Plasmide Double Nickase (h): sc-403444-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDZ-RhoGEF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDZ-RhoGEF Double Nickase Plasmid (h) e il PDZ-RhoGEF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARHGEF11. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PDZ-RhoGEF Antibody (D-9): sc-166740
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDZ-RhoGEF Plasmide Double Nickase (h) | sc-403444-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDZ-RhoGEF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403444-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF11 codifica PDZ-RhoGEF, un fattore di scambio di nucleotidi della guanina specifico per RhoA che collega la segnalazione dei GPCR accoppiati a Gα12/13 attivati all’attivazione delle GTPasi Rho e alla conseguente contrattilità actomiosinica. Attraverso la regolazione del rimodellamento del citoscheletro, della formazione di fibre di stress, della dinamica delle adesioni focali e della polarità cellulare, PDZ-RhoGEF influenza processi quali migrazione, adesione e funzione di barriera dell’epitelio. L’impalcatura mediata dal dominio PDZ e il crosstalk tra vie di segnalazione integrano input provenienti dalla segnalazione recettoriale e dai complessi giunzionali per modulare l’output della via Rho/ROCK. La deregolazione della segnalazione di RhoA e le alterazioni delle reti associate ad ARHGEF11 sono state implicate in fenotipi patologici di motilità e invasione cellulare e in cambiamenti più ampi di segnalazione rilevanti per la malattia in contesti oncologici e infiammatori.
PDZ-RhoGEF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARHGEF11 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARHGEF11. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARHGEF11. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARHGEF11 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.