PDE4B Plasmide Double Nickase (m): sc-422161-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDE4B Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PDE4B Double Nickase Plasmid (m) e il PDE4B Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Pde4b. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDE4B Plasmide Double Nickase (m) | sc-422161-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PDE4B Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422161-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Pde4b** codifica la fosfodiesterasi 4B (PDE4B), una fosfodiesterasi specifica per il cAMP che termina la segnalazione idrolizzando l’AMP ciclico in 5′-AMP. Modellando la segnalazione compartimentalizzata cAMP/PKA, PDE4B influenza programmi di fosforilazione che incidono su output trascrizionali come l’espressione genica dipendente da CREB, oltre che su risposte specifiche del tipo cellulare all’attivazione dei GPCR. L’attività di PDE4B è particolarmente rilevante nelle reti di segnalazione immunitarie e infiammatorie, in cui i livelli di cAMP modulano la produzione di citochine, l’attivazione dei leucociti e l’integrazione dei segnali a valle dei recettori che aumentano il cAMP intracellulare. Un controllo del cAMP dipendente da PDE4B alterato è stato associato a disfunzioni immunitarie e a fenotipi neurocomportamentali, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli cellulari e in vivo nel topo.
PDE4B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pde4b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pde4b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pde4b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pde4b interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.