PDE3B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401773

Panoramica

PDE3B codifica la fosfodiesterasi 3B, un’idrolasi a doppia specificità per cAMP/cGMP che modella i microdomini dei nucleotidi ciclici e controlla la segnalazione dipendente da PKA e PKG. Negli adipociti e negli epatociti, PDE3B integra gli input di insulina e catecolamine per regolare la lipolisi, i programmi gluconeogenici e l’accumulo di energia attraverso vie che includono PI3K–AKT e le reti di fosforilazione a valle. Nelle cellule β pancreatiche, PDE3B modula l’accoppiamento stimolo-secrezione regolando la dinamica del cAMP che influenza l’esocitosi dei granuli di insulina. Un’attività di PDE3B deregolata è stata associata a fenotipi metabolici che coinvolgono la sensibilità all’insulina, la segnalazione correlata all’obesità e l’omeostasi lipidica, a supporto della sua utilità in studi meccanicistici di biologia endocrina e cardiometabolica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDE3B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDE3B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDE3B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDE3B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDE3B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDE3B per lo studio della segnalazione di PDE3B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDE3B critici per la funzione di PDE3B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDE3B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDE3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDE3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDE3B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDE3B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDE3B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDE3B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDE3B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.