PDE2A Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401957-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PDE2A Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- PDE2A CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal PDE2A CRISPR Activation Plasmid (h) e dal PDE2A CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di PDE2A. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PDE2A Antibody (G-12): sc-271394
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PDE2A Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-401957-ACT | 20 µg | $397.00 | |||
PDE2A Plasmide di attivazione CRISPR (h2) | sc-401957-ACT-2 | 20 µg | $397.00 |
La PDE2A umana codifica la fosfodiesterasi 2A, una fosfodiesterasi a doppio substrato dei nucleotidi ciclici che idrolizza cAMP e cGMP e collega i segnali ossido nitrico–cGMP alle vie dipendenti dal cAMP. Modellando i gradienti di nucleotidi ciclici, PDE2A modula la segnalazione PKA/PKG, la gestione del calcio e i programmi trascrizionali a valle che influenzano l’eccitabilità neuronale e la plasticità sinaptica, oltre alle risposte vascolari e cardiache. L’attività di PDE2A è implicata nella regolazione delle risposte allo stress mitocondriale e infiammatorio attraverso cAMP/CREB e nodi di segnalazione correlati. Un turnover disfunzionale dei nucleotidi ciclici che coinvolge PDE2A è stato associato a fenotipi neuropsichiatrici e neurodegenerativi e a disfunzioni cardiometaboliche, supportandone l’impiego come bersaglio per la dissezione delle vie di segnalazione in modelli rilevanti per la malattia.
PDE2A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PDE2A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
PDE2A Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PDE2A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PDE2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDE2A. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PDE2A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDE2A nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDE2A nelle cellule tumorali con espressione di PDE2A silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.