Plásmido CRISPR de Activación (m) Pdcd-4: sc-422152-ACT

Pdcd4 (programmed cell death 4) de ratón codifica Pdcd-4, una proteína de unión a ARN asociada a la supresión tumoral que reprime la traducción dependiente del cap al inhibir la actividad helicasa de eIF4A y al modular la transcripción dependiente de AP-1. Pdcd-4 integra señales de factores de crecimiento y de vías inflamatorias, y su expresión suele estar disminuida por rutas oncogénicas como PI3K/AKT/mTOR y por control postranscripcional mediado por microARN, lo que influye en la proliferación, la apoptosis y la diferenciación celular. A través de estos mecanismos, Pdcd-4 se estudia con frecuencia en contextos de transformación, fenotipos relacionados con la metástasis y respuestas al estrés, así como en biología inmune e inflamatoria, donde el control traduccional determina programas de citocinas.

Pdcd-4 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Pdcd4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Pdcd-4 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Pdcd4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Pdcd4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Pdcd-4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Pdcd4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Pdcd-4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Pdcd-4 en células tumorales con expresión de Pdcd4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.