Pdcd-1 Plasmide Double Nickase (m): sc-422150-NIC

La morte cellulare programmata 1 (Pdcd1; PD-1, Pdcd-1) codifica un immunorecettore inibitorio espresso principalmente su cellule T attivate, cellule B e sottopopolazioni mieloidi, che limita l’attivazione immunitaria e promuove la tolleranza periferica. In seguito al legame con PD-L1 (Cd274) o PD-L2 (Pdcd1lg2), PD-1 recluta fosfatasi SHP per attenuare la segnalazione prossimale del TCR/CD28, riducendo l’attività delle vie PI3K–AKT e RAS–MAPK e limitando la produzione di citochine, la proliferazione e la riprogrammazione metabolica. Questo asse di checkpoint è centrale nell’esaurimento delle cellule T e negli stati di differenziazione durante l’esposizione cronica ad antigeni, e modella le risposte del centro germinativo e la disregolazione immunitaria associata all’autoimmunità. Nei modelli murini, la funzione di Pdcd1 è ampiamente studiata nell’immunologia dei tumori, nelle infezioni croniche e nei meccanismi delle malattie infiammatorie, in cui un’alterata segnalazione di PD-1 influisce sull’omeostasi immunitaria.

Pdcd-1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pdcd1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pdcd1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pdcd1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pdcd1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.