Plásmido Doble Nickase (m) Pdcd-1: sc-422150-NIC

La muerte celular programada 1 (Pdcd1; PD-1, Pdcd-1) codifica un inmunorreceptor inhibidor expresado principalmente en células T activadas, células B y subpoblaciones mieloides, que frena la activación inmunitaria y promueve la tolerancia periférica. Tras su interacción con PD-L1 (Cd274) o PD-L2 (Pdcd1lg2), PD-1 recluta fosfatasas SHP para atenuar la señalización proximal de TCR/CD28, reduciendo la actividad de las vías PI3K–AKT y RAS–MAPK y limitando la producción de citocinas, la proliferación y la reprogramación metabólica. Este eje de control es central para el agotamiento de las células T y los estados de diferenciación durante la exposición crónica a antígeno, y modula las respuestas del centro germinal y la desregulación inmunitaria asociada a la autoinmunidad. En modelos murinos, la función de Pdcd1 se estudia ampliamente en inmunología tumoral, infección crónica y mecanismos de enfermedades inflamatorias, donde la señalización alterada de PD-1 repercute en la homeostasis inmunitaria.

Pdcd-1 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pdcd1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pdcd1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pdcd1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pdcd1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.