PCPE-2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-411925

Panoramica

PCOLCE2 codifica la procollagen C-endopeptidase enhancer protein 2 (PCPE-2), una glicoproteina associata alla matrice extracellulare che potenzia il processamento, da parte di BMP1/proteinasi tipo tolloide, dei C-propeptidi del procollagene, promuovendo così la fibrillogenesi del collagene e la maturazione della matrice. Modulando la deposizione e il turnover del collagene, PCPE-2 contribuisce a programmi di rimodellamento tissutale legati all’attivazione dei fibroblasti, alla riparazione delle ferite e alla regolazione della meccanica stromale. Un’alterata espressione di PCOLCE2 o un’alterata attività di PCPE-2 è stata implicata nel rimodellamento fibrotico e in altre patologie caratterizzate da una disorganizzazione della matrice extracellulare. Nei sistemi umani, PCPE-2 rappresenta quindi un nodo utile per interrogare le vie della biosintesi del collagene e il crosstalk di segnalazione guidato dalla matrice.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PCPE-2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCOLCE2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCOLCE2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCOLCE2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PCPE-2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCOLCE2 per lo studio della segnalazione di PCPE-2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCOLCE2 critici per la funzione di PCPE-2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCOLCE2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PCPE-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PCPE-2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCOLCE2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PCPE-2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PCPE-2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCOLCE2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCOLCE2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.