PCMT1 Plasmide Double Nickase (h): sc-418153-NIC

PCMT1 codifica la proteina protein-L-isoaspartate (D-aspartate) O-metiltransferasi 1, un enzima di riparazione dipendente da SAM che metila residui isoaspartilici anomali generati da deamidazione spontanea o isomerizzazione di asparagina e aspartato. Questa attività di controllo qualità delle proteine sostiene la proteostasi facilitando la riconversione dei residui danneggiati verso l’aspartato normale e limitando l’accumulo, associato all’età, di proteine disfunzionali. La funzione di PCMT1 si intreccia con le risposte cellulari allo stress, il turnover proteico e il mantenimento dell’integrità di enzimi e proteine del citoscheletro in condizioni di stress ossidativo e metabolico. Alterazioni dell’attività di PCMT1 sono state implicate nella vulnerabilità neuronale e in fenotipi legati al danno proteico, rendendolo rilevante per studi di neurobiologia, invecchiamento e meccanismi di adattamento allo stress.

PCMT1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PCMT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PCMT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PCMT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PCMT1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.