PBR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419383

Panoramica

Il gene Tspo del topo codifica il recettore periferico delle benzodiazepine (PBR), una proteina di 18 kDa localizzata principalmente sulla membrana mitocondriale esterna, che lega colesterolo e porfirine e contribuisce all’omeostasi mitocondriale. Il PBR partecipa al trasporto del colesterolo e al metabolismo steroideogenico, regola la permeabilità mitocondriale e la segnalazione associata all’apoptosi, e influenza l’equilibrio delle specie reattive dell’ossigeno e le risposte infiammatorie. L’espressione di Tspo/PBR è arricchita nella microglia attivata e nelle cellule immunitarie periferiche ed è ampiamente utilizzata come marcatore di neuroinfiammazione, con ulteriore rilevanza per la disfunzione mitocondriale osservata nei disturbi neurodegenerativi e in contesti di stress metabolico. Queste funzioni rendono Tspo un nodo utile per analizzare le reti di segnalazione legate ai mitocondri che collegano lo stress cellulare all’attivazione immunitaria e al rimodellamento tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PBR (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Tspo in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Tspo insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Tspo a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PBR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Tspo per lo studio della segnalazione di PBR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Tspo critici per la funzione di PBR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Tspo per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PBR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PBR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Tspo. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PBR Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PBR (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Tspo per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Tspo definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.