PARD3B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406097

Panoramica

PARD3B (regolatore beta della polarità cellulare della famiglia PAR-3) è una proteina di impalcatura (scaffold) che contribuisce all’instaurazione e al mantenimento della polarità apico-basale nelle cellule epiteliali organizzando complessi di polarità a livello delle giunzioni strette. Agisce all’interno di reti di polarità conservate che coinvolgono le proteine PAR e la segnalazione mediata da piccole GTPasi, coordinando la localizzazione asimmetrica delle proteine, l’integrità delle giunzioni e l’organizzazione del citoscheletro. Attraverso questi processi, PARD3B influenza la migrazione cellulare, l’architettura tissutale e la compartimentalizzazione dei segnali, che possono modulare i programmi di proliferazione e differenziamento. La disregolazione dei regolatori della polarità, incluse le vie associate a PARD3B, è spesso studiata nel contesto della disorganizzazione epiteliale, di fenotipi legati all’invasione e di altri stati cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PARD3B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PARD3B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PARD3B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PARD3B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PARD3B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PARD3B per lo studio della segnalazione di PARD3B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PARD3B critici per la funzione di PARD3B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PARD3B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PARD3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PARD3B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PARD3B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PARD3B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PARD3B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PARD3B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PARD3B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.