PAK6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403345-ACT

PAK6 (p21-activated kinase 6) è una chinasi serina/treonina che agisce a valle delle GTPasi della famiglia Rho per coordinare il rimodellamento del citoscheletro, la motilità cellulare e cambiamenti nell’espressione genica dipendenti dal segnale. Integra stimoli provenienti da vie attivate da fattori di crescita e da pathway sensibili allo stress, influenzando processi quali la dinamica dell’adesione, l’estensione dei neuriti e la segnalazione di sopravvivenza attraverso reti di fosforilazione guidate dall’attività chinasica. Nelle cellule umane, un’attività alterata di PAK6 è stata associata a fenotipi proliferativi e migratori deregolati ed è stata studiata nel contesto della segnalazione associata al recettore degli androgeni e della biologia tumorale. In quanto chinasi nodale, PAK6 viene spesso indagata per il suo ruolo nel “rewiring” delle vie di segnalazione che sostiene l’adattamento cellulare sotto stress oncogeno o del microambiente.

PAK6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PAK6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PAK6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PAK6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PAK6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PAK6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PAK6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PAK6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PAK6 nelle cellule tumorali con espressione di PAK6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.