Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Paf1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-417797
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Paf1 Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Paf1, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Paf1 Antibody (E-7): sc-514491
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Paf1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-417797 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
PAF1 codifica Paf1, una subunità centrale del complesso PAF1 (PAF1C) associato alla RNA polimerasi II, che coordina l’allungamento della trascrizione con il processamento dell’RNA co-trascrizionale e la regolazione della cromatina. Attraverso interazioni con la Pol II e con il macchinario di allungamento, PAF1C influenza la pausa prossimale al promotore, la formazione dell’estremità 3′ dell’mRNA e la deposizione di marcatori istonici associati alla trascrizione attiva, inclusa la metilazione di H3K4 e H3K36. Paf1 contribuisce alla stabilità del genoma modulando i conflitti tra trascrizione e replicazione e le risposte al danno al DNA, e partecipa al controllo del ciclo cellulare e dei programmi di differenziamento. Un’attività deregolata di PAF1C e un’espressione alterata di PAF1 sono state associate a programmi trascrizionali aberranti osservati in molteplici tumori e in altre patologie che coinvolgono una disregolazione epigenetica e trascrizionale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Paf1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PAF1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PAF1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PAF1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Paf1.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PAF1 per lo studio della segnalazione di Paf1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni PAF1 critici per la funzione di Paf1
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PAF1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Paf1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Paf1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PAF1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Paf1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Paf1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PAF1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PAF1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.