PADI4 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-422177-LAC

Il gene murino Padi4 codifica la peptidil-arginina deiminasi 4 (PADI4), un enzima calcio-dipendente che catalizza la citrullinazione dei residui di arginina sugli istoni e su altre proteine nucleari. Attraverso questa modifica post-traduzionale, PADI4 influenza l’architettura della cromatina, la regolazione trascrizionale e il controllo epigenetico dei programmi di stato cellulare in contesti immunitari ed epiteliali. L’attività di PADI4 è collegata alla segnalazione dell’immunità innata e ai processi infiammatori, inclusa la regolazione della formazione delle trappole extracellulari dei neutrofili e la modulazione dell’espressione genica responsiva alle citochine. Una citrullinazione disregolata è stata associata all’autoimmunità e a meccanismi di malattie infiammatorie, rendendo Padi4 un bersaglio utile per analizzare le vie che collegano il rimodellamento della cromatina all’attivazione immunitaria.

Le particelle di attivazione lentivirale PADI4 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Padi4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PADI4 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Padi4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PADI4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Padi4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.