p300 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400055-LAC

L’EP300 umano codifica p300, una lisina acetiltransferasi multifunzionale e coattivatore trascrizionale che integra segnali provenienti da diversi fattori di trascrizione per regolare l’accessibilità della cromatina e i programmi di espressione genica. p300 acetila istoni e substrati non istonici e partecipa a vie fondamentali che controllano la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno del DNA, la differenziazione, il metabolismo e la segnalazione immunitaria, spesso in coordinamento con CREB, p53, NF-κB e i recettori nucleari. Attraverso il suo ruolo nella regolazione di enhancer e promotori, p300 contribuisce a modellare la trascrizione specifica di linea e le risposte adattative allo stress. La deregolazione dell’attività o dell’espressione di EP300/p300 è implicata in stati trascrizionali oncogeni e in altri disturbi associati a un’alterata regolazione della cromatina e del controllo trascrizionale.

Le particelle di attivazione lentivirale p300 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di EP300 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale p300 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione EP300, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di p300. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo EP300 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.