P2Y9 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-429620

Descripción general

Lpar4 codifica el receptor purinérgico P2Y9, un receptor acoplado a proteína G implicado en la señalización mediada por nucleótidos/lípidos extracelulares, que influye en la comunicación celular, en cascadas de segundos mensajeros próximas a la membrana y en la regulación, dependiente del contexto, de la motilidad y la diferenciación. En sistemas murinos, la señalización de la familia P2Y suele converger en vías que controlan la dinámica del calcio intracelular, el equilibrio de AMPc y redes de quinasas aguas abajo que coordinan la remodelación del citoesqueleto y las respuestas transcripcionales. Por ello, la actividad de Lpar4/P2Y9 es relevante para estudios del tráfico de células inmunitarias, el crosstalk estromal–epitelial y la homeostasis tisular. La desregulación de la señalización purinérgica impulsada por GPCR se ha asociado con fenotipos inflamatorios y fibróticos, así como con alteraciones en la señalización del crecimiento, lo que convierte a Lpar4 en un nodo útil para la investigación mecanística de vías.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO P2Y9 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Lpar4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Lpar4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Lpar4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína P2Y9.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Lpar4 para la investigación de la señalización de P2Y9, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Lpar4 críticos para la función de P2Y9
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Lpar4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido P2Y9 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido P2Y9 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Lpar4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR P2Y9 (m) y el plásmido HDR P2Y9 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Lpar4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Lpar4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.