P2X7 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-422093-ACT

O P2rx7 murino codifica o recetor P2X7, um canal catiónico regulado por ATP, altamente expresso em células imunitárias e gliais, que liga sinais extracelulares de perigo ao influxo de Ca²⁺/Na⁺, ao efluxo de K⁺ e à formação de poros na membrana sob estimulação sustentada. O P2X7 é um regulador-chave a montante da sinalização do inflamassoma, promovendo a ativação de NLRP3 e a maturação de IL-1β/IL-18, e também influencia a atividade de fosfolipases, as vias MAPK/NF-κB e programas de morte celular. Por estes mecanismos, o P2rx7 contribui para a regulação da libertação de citocinas, das respostas antimicrobianas de fagócitos e da comunicação neuroimune. Alterações na sinalização de P2X7 têm sido associadas a fenótipos inflamatórios e neuroinflamatórios, hipersensibilidade à dor e imunorregulação do microambiente tumoral em modelos pré-clínicos, apoiando o seu valor para estudos centrados em vias de sinalização.

P2X7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de P2rx7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

P2X7 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus P2rx7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição P2rx7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de P2X7. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus P2rx7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de P2X7 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via P2X7 em células tumorais com expressão de P2rx7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.