OSMR β Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402700-ACT

L’OSMR umano codifica la subunità β del recettore per l’oncostatina M, un componente di trasduzione del segnale della famiglia dei recettori per citochine di tipo I che si associa a gp130 per mediare le risposte all’oncostatina M e a citochine correlate della famiglia dell’IL-6. Il legame con il ligando attiva la segnalazione JAK/STAT, con ulteriore coinvolgimento delle vie MAPK e PI3K/AKT, che regolano l’espressione di geni infiammatori, i programmi epitelio–mesenchimali, il rimodellamento della matrice extracellulare e la sopravvivenza cellulare. L’attività di OSMRβ è stata associata a cambiamenti dipendenti dal contesto nel dialogo tra stroma e sistema immunitario, nei processi di riparazione delle ferite e in fenotipi fibrotici o infiammatori in numerosi tessuti. La segnalazione deregolata della via OSMR è spesso studiata per il suo ruolo nell’infiammazione cronica e nei meccanismi di malattia guidati dal microambiente.

OSMR β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di OSMR senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

OSMR β Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus OSMR nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione OSMR, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di OSMR β. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus OSMR nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da OSMR β nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via OSMR β nelle cellule tumorali con espressione di OSMR silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.