OGFR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407303

Übersicht

Der Opioidwachstumsfaktor-Rezeptor (OGFR) ist ein ubiquitär exprimierter, nicht-klassischer Opioidrezeptor, der an [Met5]-Enkephalin (Opioidwachstumsfaktor) bindet und so die Zellproliferation sowie die Gewebehomöostase reguliert. Die OGFR-Signalgebung ist am besten über die OGF–OGFR-Achse charakterisiert, die den Verlauf des Zellzyklus moduliert, indem sie Signalwege der cyclinabhängigen Kinaseinhibitoren beeinflusst und die DNA-Synthese in unterschiedlichen Zelltypen begrenzt. Dieser Rezeptor wurde mit der Erneuerung von Epithelgewebe, dem Verhalten von Immun- und Stromazellen sowie einer stressabhängigen Wachstumskontrolle in Verbindung gebracht und verknüpft die OGFR-Biologie damit mit Kontexten wie Krebszellproliferation, Wundheilung und entzündlicher Pathologie. Daher wird eine Veränderung der OGFR-Expression häufig genutzt, um endogene wachstumshemmende Signalnetzwerke und deren Wechselwirkungen mit mitogenen Signalwegen zu untersuchen.

Das OGFR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des OGFR-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des OGFR-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von OGFR nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die OGFR-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von OGFR-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der OGFR-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf OGFR-Exone abzielen, die für die OGFR-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere OGFR-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom OGFR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom OGFR CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des OGFR-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das OGFR HDR-Plasmid (h) und OGFR HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von OGFR-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten OGFR-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.