OGFR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407303

Panoramica

Il recettore del fattore di crescita oppioide (OGFR) è un recettore oppioide non classico, espresso in modo ubiquitario, che lega la [Met5]-encefalina (fattore di crescita oppioide) per regolare la proliferazione cellulare e l’omeostasi tissutale. La segnalazione di OGFR è caratterizzata soprattutto attraverso l’asse OGF–OGFR, che modula la progressione del ciclo cellulare influenzando le vie degli inibitori delle chinasi ciclina-dipendenti e limitando la sintesi del DNA in diversi tipi cellulari. Questo recettore è stato implicato nel rinnovamento epiteliale, nel comportamento delle cellule immunitarie e stromali e nel controllo della crescita in risposta allo stress, collegando la biologia di OGFR a contesti quali la proliferazione delle cellule tumorali, la riparazione delle ferite e la patologia infiammatoria. Di conseguenza, la perturbazione dell’espressione di OGFR è comunemente utilizzata per analizzare le reti endogene di segnalazione che inibiscono la crescita e la loro interazione con le vie mitogeniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO OGFR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OGFR in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OGFR insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OGFR a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina OGFR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OGFR per lo studio della segnalazione di OGFR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OGFR critici per la funzione di OGFR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OGFR per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal OGFR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal OGFR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OGFR. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal OGFR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR OGFR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OGFR per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OGFR definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.