OAT2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403923-ACT

SLC22A7 codifica o transportador humano de ânions orgânicos 2 (OAT2), um transportador de solutos poliespecífico que medeia a captação celular e a troca de ânions orgânicos endógenos e de metabólitos xenobióticos. A atividade do OAT2 contribui para o processamento hepático e renal de pequenas moléculas, influenciando o equilíbrio intracelular de ânions e o acoplamento a processos metabólicos e de desintoxicação por meio de redes coordenadas de transportadores. Ao moldar a exposição celular a compostos com características de fármacos e a intermediários metabólicos, o OAT2 é relevante para estudos de farmacocinética, de disposição de fármacos mediada por transportadores e da variabilidade na sensibilidade química específica de tecidos. Assim, a desregulação da expressão ou da função do transportador é de interesse em pesquisas mecanísticas sobre a fisiologia do fígado e dos rins e sobre alterações associadas a doenças nas vias de depuração de xenobióticos.

OAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de SLC22A7 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

OAT2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus SLC22A7 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição SLC22A7, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de OAT2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus SLC22A7 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de OAT2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via OAT2 em células tumorais com expressão de SLC22A7 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.