Nup37 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409458-LAC

NUP37 codifica Nup37, un componente centrale del sottocomplesso Nup107–160 del complesso del poro nucleare, che sostiene l’assemblaggio dell’involucro nucleare e il trasporto nucleo‑citoplasmatico di proteine e RNA. Contribuendo all’architettura dell’NPC, Nup37 aiuta a coordinare la progressione del ciclo cellulare, gli eventi mitotici e la regolazione del genoma attraverso un traffico controllato di fattori di trascrizione e mediatori della segnalazione. Le alterazioni nella composizione dei pori nucleari sono spesso associate a una modificazione dell’organizzazione della cromatina e dei segnali di risposta allo stress, rendendo NUP37 un utile punto di partenza per studiare la regolazione della proliferazione e della differenziazione dipendente dal trasporto. Un’espressione disregolata o una dipendenza dalla funzione delle nucleoporine è stata riportata in molteplici contesti tumorali, a supporto della ricerca sulle vulnerabilità del trasporto nucleare e sul “rewiring” delle vie di segnalazione, senza implicare un uso terapeutico.

Le particelle di attivazione lentivirale Nup37 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di NUP37 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Nup37 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione NUP37, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Nup37. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo NUP37 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.