Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NTCP Plasmide Double Nickase (h): sc-400840-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NTCP Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NTCP Double Nickase Plasmid (h) e il NTCP Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira SLC10A1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NTCP Antibody (D-5): sc-518115
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NTCP Plasmide Double Nickase (h) | sc-400840-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NTCP Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400840-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SLC10A1 codifica il polipeptide cotrasportatore sodio/taurocolato (NTCP), un trasportatore della membrana basolaterale degli epatociti che media l’assorbimento, dipendente dal sodio, degli acidi biliari coniugati e di altri anioni organici dal sangue portale. L’attività di NTCP è parte integrante della circolazione enteroepatica degli acidi biliari e influenza reti di segnalazione intracellulari attivate dagli acidi biliari, inclusi i programmi trascrizionali regolati da FXR che collegano il trasporto all’omeostasi metabolica. Alterazioni della funzione di SLC10A1/NTCP possono perturbare la gestione degli acidi biliari e la fisiologia epatica, fornendo un legame meccanicistico con fenotipi colestatici e con una più ampia disregolazione del metabolismo lipidico e glucidico. NTCP funge anche da fattore dell’ospite per l’ingresso di patogeni negli epatociti, risultando quindi rilevante per studi sulla biologia delle infezioni epatotrope e sui processi di internalizzazione mediati da recettori.
NTCP Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SLC10A1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SLC10A1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SLC10A1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SLC10A1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.