NSUN4 Plasmide Double Nickase (m): sc-428269-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NSUN4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NSUN4 Double Nickase Plasmid (m) e il NSUN4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nsun4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NSUN4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428269-NIC | 20 µg | $410.00 |
Nsun4 codifica NSUN4, una metiltransferasi mitocondriale dell’RNA citosina-5 che metila l’mt-rRNA e sostiene la biogenesi e la traduzione dei ribosomi mitocondriali. Coordinandosi con il macchinario mitocondriale di trascrizione/traduzione, NSUN4 contribuisce a mantenere la capacità di fosforilazione ossidativa e la funzione della catena respiratoria, collegandosi così al metabolismo energetico cellulare e al controllo di qualità mitocondriale. È prevedibile che l’alterazione dell’attività di NSUN4 modifichi la sintesi proteica mitocondriale e le vie di segnalazione bioenergetica che influenzano le risposte allo stress e le decisioni sul destino cellulare. Di conseguenza, Nsun4 è spesso studiato in contesti in cui la disfunzione mitocondriale contribuisce a fenotipi rilevanti per la malattia, inclusi neurodegenerazione, squilibrio cardiometabolico e difetti dello sviluppo.
NSUN4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nsun4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nsun4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nsun4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nsun4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.