NRAMP 1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402423

Panoramica

SLC11A1 codifica NRAMP1, un trasportatore di metalli bivalenti accoppiato ai protoni, associato principalmente alle membrane endosomiali e fagosomiali delle cellule mieloidi, dove regola il flusso di Fe²⁺ e Mn²⁺ e determina la disponibilità di metalli all’interno dei compartimenti che contengono patogeni. Controllando la composizione metallica intravescicolare, NRAMP1 influenza i programmi effettrici antimicrobici, l’equilibrio redox e la segnalazione dell’immunità innata, che intersecano le vie infiammatorie e la gestione degli antigeni. La variabilità genetica o un’espressione alterata di SLC11A1 è stata collegata a differenze nella suscettibilità alle infezioni intracellulari e alla modulazione dei fenotipi infiammatori, rendendolo un locus utile per studi su interazione ospite–patogeno e regolazione immunitaria. Nei modelli cellulari umani, la funzione di NRAMP1 viene spesso studiata nel contesto dell’attivazione dei macrofagi, della maturazione del fagosoma e dei meccanismi di limitazione dei nutrienti che influenzano la persistenza microbica.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NRAMP 1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene SLC11A1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del SLC11A1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto SLC11A1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NRAMP 1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di SLC11A1 per lo studio della segnalazione di NRAMP 1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni SLC11A1 critici per la funzione di NRAMP 1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di SLC11A1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NRAMP 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NRAMP 1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus SLC11A1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NRAMP 1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NRAMP 1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia SLC11A1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio SLC11A1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.