NR5A2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424058-ACT

Il gene murino **Nr5a2** codifica il recettore nucleare **NR5A2 (LRH-1)**, un fattore di trascrizione legante il DNA che regola programmi coinvolti nel metabolismo dei lipidi e degli acidi biliari, nella steroidogenesi e nella differenziazione epiteliale. NR5A2 integra segnali di diversa natura per coordinare reti trascrizionali implicate nella specificazione dello sviluppo e nell’omeostasi tissutale, incluse vie associate alla regolazione metabolica e alle risposte infiammatorie. Nel pancreas e nell’intestino, NR5A2 influenza la funzione esocrina e il rinnovamento dell’epitelio, e un’attività alterata di NR5A2 è stata associata a fenotipi metabolici e a stati trascrizionali oncogenici nei tessuti gastrointestinali. Queste caratteristiche rendono **Nr5a2** un bersaglio utile per analizzare la regolazione genica guidata dai recettori nucleari, il controllo trascrizionale dipendente dalla cromatina e programmi di linea cellulare specifici del contesto in sistemi modello murini.

NR5A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Nr5a2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NR5A2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Nr5a2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Nr5a2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NR5A2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Nr5a2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NR5A2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NR5A2 nelle cellule tumorali con espressione di Nr5a2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.