NPR-C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421949

Panoramica

Il gene murino **Npr3** codifica il recettore C dei peptidi natriuretici (**NPR-C**), un recettore di membrana che lega **ANP**, **BNP** e **CNP** per regolarne la disponibilità e la segnalazione a valle. NPR-C è ampiamente caratterizzato come recettore di “clearance” che modula la segnalazione cGMP guidata dai peptidi natriuretici controllando il turnover dei ligandi, influenzando così il tono vascolare, il rimodellamento cardiaco, la gestione renale del sodio e l’omeostasi dei fluidi. Oltre alla clearance dei peptidi, NPR-C è stato collegato alla segnalazione associata a **Gi/adenilato ciclasi** e all’endocitosi mediata dal recettore in diversi tipi cellulari. La disregolazione delle vie mediate da NPR-C è stata associata a fenotipi cardiometabolici e cardiovascolari, rendendo **Npr3** un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla regolazione della pressione arteriosa e sul rimodellamento tissutale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NPR-C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Npr3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Npr3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Npr3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NPR-C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Npr3 per lo studio della segnalazione di NPR-C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Npr3 critici per la funzione di NPR-C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Npr3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NPR-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NPR-C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Npr3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NPR-C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NPR-C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Npr3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Npr3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.