Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NPC1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421941-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NPC1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NPC1 Double Nickase Plasmid (m) e il NPC1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Npc1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NPC1 Antibody (G-1): sc-271335
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NPC1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421941-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NPC1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421941-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Npc1 codifica per NPC1, una proteina di membrana lisosomiale a multipli passaggi che coopera con NPC2 per mobilizzare il colesterolo non esterificato e altri lipidi dagli endosomi tardivi/lisosomi verso le membrane cellulari. Regolando il traffico intracellulare degli steroli, NPC1 influenza l’omeostasi del colesterolo, la funzione lisosomiale e le vie di segnalazione metabolica a valle che dipendono da una corretta composizione lipidica delle membrane. L’alterazione dell’attività di NPC1 provoca accumulo lisosomiale di lipidi e ampie perturbazioni del trasporto endolisosomiale e dei processi associati all’autofagia. Npc1 è quindi ampiamente utilizzato come punto di accesso genetico per modellare fenotipi di accumulo lipidico e per analizzare i meccanismi di regolazione metabolica centrata sul lisosoma nelle cellule murine.
NPC1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Npc1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Npc1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Npc1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Npc1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.