Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NKG2-D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-424169
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NKG2-D Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico NKG2-D, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NKG2-D Antibody (A-7): sc-515599
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NKG2-D Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m) | sc-424169 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
Klrk1 codifica l’immunorecettore attivante NKG2-D (KLRK1), un recettore di tipo II transmembrana simile alle lectine di tipo C, espresso nelle cellule NK murine e in sottopopolazioni di linfociti T CD8+. NKG2-D riconosce ligandi inducibili dallo stress e segnala tramite proteine adattatrici per avviare vie PI3K-, Vav1- e Syk/ZAP70-dipendenti che promuovono il rilascio di granuli citotossici, la produzione di citochine e la sorveglianza immunitaria. Questo asse integra segnali derivanti da danno al DNA, infezione e trasformazione cellulare, plasmando le risposte effettrici dell’immunità innata e adattativa. In modelli sperimentali, interazioni NKG2-D–ligando deregolate sono state implicate nell’elusione immunitaria dei tumori, nell’infiammazione cronica e in un controllo alterato di tessuti infettati da virus o sottoposti a stress.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NKG2-D (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Klrk1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Klrk1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Klrk1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NKG2-D.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Klrk1 per lo studio della segnalazione di NKG2-D, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni Klrk1 critici per la funzione di NKG2-D
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Klrk1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal NKG2-D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NKG2-D CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Klrk1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal NKG2-D Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NKG2-D (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Klrk1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Klrk1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.