NIPBL Plasmide Double Nickase (m): sc-427895-NIC

Nipbl codifica NIPBL, un fattore di caricamento della coesina che coordina la coesione tra cromatidi fratelli e l’organizzazione della cromatina di ordine superiore durante il ciclo cellulare. Nelle cellule murine, NIPBL supporta la comunicazione a lunga distanza tra enhancer e promotori e programmi di controllo trascrizionale che regolano lo sviluppo embrionale, la specificazione di linea e le risposte al danno al DNA. L’alterazione di Nipbl compromette l’architettura genomica dipendente dalla coesina e può influenzare la segnalazione dello stress replicativo, la segregazione cromosomica e le reti di espressione genica. Poiché una funzione alterata di NIPBL è associata a deregolazione dei geni dello sviluppo e a difetti di stabilità del genoma, rappresenta un bersaglio utile per studiare le coesinopatie e i meccanismi di malattia associati alla cromatina in modelli in vivo e in vitro.

NIPBL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nipbl nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nipbl. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nipbl. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nipbl interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.