Plásmido CRISPR de Activación (h) NIK: sc-400620-ACT

MAP3K14 codifica la quinasa inductora de NF-κB (NIK), una MAP3K central que impulsa la vía no canónica de NF-κB al promover el procesamiento de p100 (NFKB2) a p52 dependiente de IKKα y al regular programas transcripcionales de RELB. NIK integra señales aguas abajo de receptores como BAFFR, CD40, LTβR y RANK para controlar la organogénesis linfoide, la maduración de células B, la diferenciación de osteoclastos y la expresión de genes inflamatorios. La regulación estricta de la estabilidad de NIK y de la amplitud de su señalización es esencial para la homeostasis inmunitaria, y la actividad desregulada de MAP3K14 se ha asociado con alteraciones de la señalización de NF-κB en trastornos inmunológicos e inflamatorios, así como en contextos de neoplasias hematológicas. Como nodo de señalización, NIK se estudia con frecuencia para cartografiar el acoplamiento receptor-transcripción, el crosstalk entre vías y las respuestas adaptativas al estrés.

NIK El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de MAP3K14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NIK El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus MAP3K14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional MAP3K14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NIK. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo MAP3K14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NIK en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NIK en células tumorales con expresión de MAP3K14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.