NFATc1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400164-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NFATc1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NFATc1 Double Nickase Plasmid (h) e il NFATc1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NFATC1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NFATc1 Antibody (7A6): sc-7294
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NFATc1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400164-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NFATc1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400164-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFATC1 codifica NFATc1, un fattore di trascrizione regolato dal calcio e attivato a valle della calcineurina in risposta alla segnalazione del recettore delle cellule T e di altre vie degli immunorecettori. Dopo la defosforilazione, NFATc1 trasloca nel nucleo per coordinare programmi trascrizionali che modellano l’attivazione immunitaria, l’espressione di citochine e gli stati di differenziamento; contribuisce inoltre all’osteoclastogenesi e a programmi di rimodellamento tissutale. NFATc1 integra la segnalazione Ca2+/NFAT con input dipendenti da MAPK e AP-1 per modulare finemente l’espressione genica in modo specifico per il contesto. Un’attività deregolata di NFATC1 è stata implicata in fenotipi immunitari e infiammatori, così come nella riprogrammazione trascrizionale associata al cancro, a supporto della sua utilità come nodo per studi meccanicistici delle vie di segnalazione.
NFATc1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NFATC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NFATC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NFATC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NFATC1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.