Plasmide CRISPR d'Activation (h) NF-YA: sc-401085-ACT

NFYA code la sous-unité NF‑YA du facteur de transcription hétérotrimérique NF‑Y, qui se fixe aux motifs de type boîte CCAAT et coordonne l’architecture des promoteurs avec l’état de la chromatine afin de contrôler la transcription basale et inductible. NF‑YA contribue à la régulation de la progression du cycle cellulaire, de la réplication et de la réparation de l’ADN, de programmes géniques métaboliques et de voies de réponse au stress, via des interactions coopératives avec d’autres facteurs de transcription et des complexes coactivateurs. Des altérations de l’activité de NFYA ou des réseaux de gènes cibles de NF‑Y ont été associées à une prolifération et une différenciation dérégulées, avec une pertinence pour des programmes transcriptionnels oncogéniques et des modifications plus larges de l’expression génique observées dans de multiples contextes pathologiques. Ces propriétés font de NFYA un nœud utile pour étudier la régulation dépendante des promoteurs, les circuits transcriptionnels et le remodelage des voies dans des modèles cellulaires humains.

NF-YA Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NFYA sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NF-YA Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NFYA dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NFYA, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NF-YA. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NFYA natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NF-YA au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NF-YA dans les cellules tumorales présentant une expression de NFYA silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.