NF-L Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402254

Panoramica

NEFL codifica la catena leggera dei neurofilamenti (NF-L), una proteina fondamentale dei filamenti intermedi che si assembla con NEFM e NEFH per formare il citoscheletro neuronale e mantenere il calibro assonale e la stabilità meccanica. NF-L partecipa al trasporto e all’organizzazione dei neurofilamenti, influenzando il traffico assonale, la dinamica del citoscheletro e la connettività neuronale a lunga distanza. L’alterazione della funzione di NEFL compromette l’assemblaggio dei neurofilamenti e l’integrità dell’assone, collegando le vie di stress del citoscheletro a una disfunzione neuronale progressiva. Varianti e un’omeostasi alterata di NF-L sono associate a neuropatie ereditarie e a processi neurodegenerativi in cui la struttura e il trasporto assonale risultano compromessi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NF-L (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NEFL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NEFL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NEFL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NF-L.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NEFL per lo studio della segnalazione di NF-L, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NEFL critici per la funzione di NF-L
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NEFL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NF-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NF-L CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NEFL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NF-L Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NF-L (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NEFL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NEFL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.