nestin Plasmide Double Nickase (h): sc-400156-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- nestin Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il nestin Double Nickase Plasmid (h) e il nestin Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NES. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: nestin Antibody (D-9): sc-377380
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
nestin Plasmide Double Nickase (h) | sc-400156-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
nestin Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400156-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NES codifica la nestina, una proteina dei filamenti intermedi di classe VI arricchita nelle cellule staminali neurali e nelle cellule progenitrici, dove supporta l’organizzazione del citoscheletro durante proliferazione, migrazione e impegno di linea. La nestina partecipa al rimodellamento del citoscheletro e a programmi legati al ciclo cellulare, integrando segnali provenienti da vie di sviluppo che regolano staminalità e differenziamento, tra cui Notch, Wnt/β-catenina e la segnalazione MAPK/PI3K-AKT indotta da fattori di crescita. La sua espressione è ampiamente utilizzata come marcatore dei progenitori neuroepiteliali e dell’astrogliosi reattiva, ed è spesso indotta durante il rimodellamento tissutale e le risposte cellulari allo stress. Un’espressione deregolata di NES è associata ad alterazioni degli stati di differenziamento ed è stata riportata in molteplici tumori e contesti di neurosviluppo, rendendola rilevante per lo studio della biologia dei progenitori e delle transizioni di stato cellulare associate alla malattia.
nestin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NES nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NES. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NES. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NES interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.