Plásmido CRISPR de Activación (m) NEGR1: sc-435831-ACT

Negr1 codifica el regulador del crecimiento neuronal 1 (NEGR1), una molécula de adhesión celular de la familia IgLON anclada a GPI, enriquecida en la superficie neuronal, donde favorece el crecimiento de neuritas, la organización sináptica y la maduración de los circuitos. En modelos del sistema nervioso de ratón, NEGR1 se ha vinculado con la conectividad dependiente de la actividad y con la señalización en microdominios de membrana que influye en la guía axonal y la dinámica de las espinas dendríticas. La alteración de la expresión de NEGR1 se ha asociado con fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, y estudios genéticos han relacionado loci de NEGR1 con la regulación del peso corporal y rasgos conductuales. Estas características hacen de NEGR1 un nodo útil para estudiar la señalización mediada por adhesión, la plasticidad estructural y las relaciones genotipo–fenotipo en contextos de investigación cerebral y metabólica.

NEGR1 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Negr1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NEGR1 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Negr1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Negr1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NEGR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Negr1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NEGR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NEGR1 en células tumorales con expresión de Negr1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.