NEDD4 Plasmide Double Nickase (m): sc-421848-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NEDD4 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NEDD4 Double Nickase Plasmid (m) e il NEDD4 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Nedd4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NEDD4 Antibody (F-11): sc-518160
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NEDD4 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421848-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NEDD4 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421848-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Nedd4 codifica per la ligasi E3 dell’ubiquitina NEDD4, un enzima con dominio HECT che regola il turnover proteico e l’ampiezza della segnalazione catalizzando l’ubiquitinazione di recettori di membrana, trasportatori e adattatori di segnalazione. Attraverso interazioni con substrati e proteine adattatrici contenenti il motivo PPxY, NEDD4 influenza l’endocitosi, il traffico vescicolare e la proteostasi, e si interseca con vie quali la segnalazione EGFR/RTK, PI3K–AKT e TGF-β/SMAD. NEDD4 modula inoltre l’abbondanza di canali ionici e trasportatori, contribuendo al trasporto epiteliale e all’eccitabilità neuronale. Un’attività di NEDD4 deregolata è stata collegata in letteratura a una segnalazione di crescita alterata, a risposte immunitarie e infiammatorie e a fenotipi rilevanti per la biologia del cancro e per disturbi del neurosviluppo, supportandone l’impiego in studi meccanicistici della regolazione ubiquitina-dipendente.
NEDD4 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nedd4 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nedd4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nedd4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nedd4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.