Plásmido CRISPR de Activación (h) Nectin 1: sc-401328-ACT

NECTIN1 codifica nectina‑1, una molécula de adhesión celular tipo inmunoglobulina concentrada en las uniones adherentes que media interacciones homofílicas y heterofílicas independientes de Ca2+ para estabilizar los contactos célula‑célula. La nectina‑1 se une a afadina (AF6) y coopera con los complejos cadherina–catenina para regular el ensamblaje de las uniones, la polaridad epitelial y la remodelación del citoesqueleto de actina, influyendo así en la morfogénesis tisular y la integridad de la barrera. Más allá de la adhesión, la nectina‑1 contribuye a la señalización mediada por contacto que afecta la migración celular y los programas de diferenciación. La alteración de la función o la expresión de NECTIN1 se ha relacionado con anomalías del desarrollo que afectan tejidos craneofaciales y ectodérmicos, lo que respalda su relevancia en estudios sobre organización epitelial y defectos de adhesión asociados a enfermedad.

Nectin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NECTIN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nectin 1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NECTIN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NECTIN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nectin 1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NECTIN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nectin 1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nectin 1 en células tumorales con expresión de NECTIN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.