Nectin 1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401328-ACT

NECTIN1 codifica la nectina-1, una molecola di adesione cellulare di tipo immunoglobulinico concentrata nelle giunzioni aderenti, che media interazioni omofiliche ed eterofiliche indipendenti dal Ca2+ per stabilizzare i contatti cellula–cellula. La nectina-1 interagisce con afadina (AF6) e si coordina con i complessi cadherina–catenina per regolare l’assemblaggio delle giunzioni, la polarità epiteliale e il rimodellamento del citoscheletro di actina, influenzando così la morfogenesi dei tessuti e l’integrità della barriera. Oltre all’adesione, la nectina-1 contribuisce a segnali mediati dal contatto che incidono sulla migrazione cellulare e sui programmi di differenziamento. Alterazioni della funzione o dell’espressione di NECTIN1 sono state associate ad anomalie dello sviluppo che interessano i tessuti craniofacciali ed ectodermici, a supporto della sua rilevanza negli studi sull’organizzazione epiteliale e sui difetti di adesione legati a patologie.

Nectin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NECTIN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Nectin 1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NECTIN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NECTIN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Nectin 1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NECTIN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Nectin 1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Nectin 1 nelle cellule tumorali con espressione di NECTIN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.