NCAM/CD56 Plasmide Double Nickase (h): sc-400302-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NCAM/CD56 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NCAM/CD56 Double Nickase Plasmid (h) e il NCAM/CD56 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira NCAM1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NCAM/CD56 Antibody (123C3): sc-7326
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NCAM/CD56 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400302-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NCAM/CD56 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400302-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NCAM1 codifica la molecola di adesione cellulare neurale NCAM/CD56, una glicoproteina della superfamiglia delle immunoglobuline che media interazioni cellula–cellula e cellula–matrice indipendenti dal Ca²⁺. Attraverso legami omofilici ed eterofilici, NCAM/CD56 regola la crescita dei neuriti, la guida assonale, la plasticità sinaptica e la migrazione, e può trasdurre segnali tramite le vie Fyn/FAK, MAPK/ERK e i processi di rimodellamento del citoscheletro. Lo splicing alternativo e la polisialilazione modulano la forza adesiva e la motilità cellulare dinamica durante lo sviluppo e la riparazione tissutale. Un’espressione o modificazione deregolata di NCAM1 è associata ad alterazioni dei processi di neurosviluppo ed è anche utilizzata come marcatore funzionale nella biologia delle cellule NK e negli studi sull’invasione delle cellule tumorali e sulle interazioni immunitarie.
NCAM/CD56 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NCAM1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NCAM1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NCAM1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NCAM1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.