NAT-8L Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-415533-ACT

Il gene umano **NAT8L** codifica **NAT-8L**, un’N-acetiltransferasi che catalizza la formazione di **N-acetilaspartato (NAA)** a partire da aspartato e acetil-CoA, collegando la disponibilità mitocondriale di acetil-CoA al metabolismo degli amminoacidi e dell’acetato. Il NAA partecipa alla gestione del carbonio cellulare e all’omeostasi dei gruppi acetile, con implicazioni a valle per la sintesi lipidica e per processi correlati alla mielina nel sistema nervoso. L’attività di NAT8L è quindi rilevante per il rimodellamento metabolico e l’accoppiamento neurone–glia, e l’alterazione delle vie associate al NAA è stata collegata a fenotipi neurologici e a disfunzioni del neurosviluppo. In quanto nodo metabolico misurabile, NAT8L è spesso analizzato in studi sulla funzione mitocondriale, sull’equilibrio dell’acetilazione e sul metabolismo energetico cerebrale.

NAT-8L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di NAT8L senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

NAT-8L Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus NAT8L nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione NAT8L, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di NAT-8L. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus NAT8L nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da NAT-8L nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via NAT-8L nelle cellule tumorali con espressione di NAT8L silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.