NanogNB Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-418788

Panoramica

NANOGNB (NanogNB) è un gene umano correlato a NANOG, implicato in programmi regolatori legati alla pluripotenza e all’espressione genica delle prime fasi dello sviluppo. In quanto paralogo/fattore correlato ai circuiti centrali della “stemness”, NanogNB viene studiato nel contesto del controllo trascrizionale, della specificazione del destino cellulare e del mantenimento dello stato epigenetico, con potenziali interazioni con vie di segnalazione che regolano autorinnovamento e differenziamento. L’espressione alterata dei geni della famiglia NANOG viene frequentemente valutata in modelli di plasticità delle cellule tumorali, biologia delle cellule germinali e riprogrammazione, in cui cambiamenti nelle reti trascrizionali di tipo staminale possono influenzare proliferazione e impegno di linea. NANOGNB rappresenta quindi un bersaglio utile per analizzare come l’architettura regolatoria associata a NANOG contribuisca ai processi di sviluppo e a fenotipi cellulari rilevanti per la malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NanogNB (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NANOGNB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NANOGNB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NANOGNB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NanogNB.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NANOGNB per lo studio della segnalazione di NanogNB, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NANOGNB critici per la funzione di NanogNB
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NANOGNB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NanogNB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NanogNB CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NANOGNB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NanogNB Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NanogNB (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NANOGNB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NANOGNB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.