MYCBP Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404476-ACT

MYCBP (proteina legante MYC) è un cofattore nucleare che si lega alla regione N-terminale di c-MYC e modula programmi trascrizionali dipendenti da MYC che controllano la crescita cellulare, il metabolismo e la progressione del ciclo cellulare. Influenzando la regolazione, mediata da MYC/MAX, dei geni bersaglio della RNA polimerasi II, MYCBP contribuisce a vie che governano la biogenesi dei ribosomi, la proliferazione e le risposte cellulari allo stress. Un’alterata espressione di MYCBP o uno squilibrio regolatorio MYC–MYCBP è stato associato a stati trascrizionali oncogeni, rendendolo rilevante per studi sulla biologia dei tumori, la “dipendenza trascrizionale” e il rimodellamento delle reti regolatorie. I suoi effetti dipendenti dal contesto sull’attività di MYC supportano l’indagine su come la disponibilità di cofattori possa modulare fenotipi guidati da oncogeni.

MYCBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYCBP senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYCBP Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYCBP nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYCBP, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYCBP. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYCBP nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYCBP nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYCBP nelle cellule tumorali con espressione di MYCBP silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.