Myc Plasmide Double Nickase (h): sc-400001-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Myc Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Myc Double Nickase Plasmid (h) e il Myc Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MYC. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Myc Antibody (9E10): sc-40
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Myc Plasmide Double Nickase (h) | sc-400001-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Myc Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400001-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYC codifica il fattore di trascrizione Myc, un regolatore centrale della crescita cellulare, del metabolismo e della proliferazione attraverso il controllo di programmi trascrizionali dipendenti dall’RNA polimerasi II. Myc coordina la biogenesi dei ribosomi, il metabolismo dei nucleotidi e degli amminoacidi, la funzione mitocondriale e la progressione del ciclo cellulare, integrando i segnali mitogeni provenienti da vie quali MAPK/ERK e PI3K/AKT. Un’attività di MYC deregolata è fortemente associata alla trasformazione oncogenica, all’instabilità genomica e ad alterazioni della differenziazione, rendendolo un driver ampiamente studiato in biologia del cancro. Poiché Myc influenza l’accessibilità della cromatina e l’amplificazione trascrizionale, la perturbazione di MYC è spesso utilizzata per mappare reti di regolazione genica e vulnerabilità specifiche del contesto.
Myc Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MYC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MYC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MYC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MYC interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.