musculin Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403242-ACT

Il gene umano **MSC** codifica **musculin**, un fattore di trascrizione basic helix–loop–helix (bHLH) che regola programmi di espressione genica specifici di linea attraverso il legame al DNA in modo dipendente dalla sequenza e interazioni cooperative con altri regolatori trascrizionali. Musculin influenza le decisioni di destino cellulare e le reti trascrizionali associate alla differenziazione, inclusi contesti miogenici e immuno-correlati in cui i fattori bHLH coordinano l’accessibilità della cromatina e l’output trascrizionale. Modulando geni bersaglio a valle coinvolti in proliferazione, differenziazione e segnalazione responsiva allo stress, **MSC** contribuisce al mantenimento dell’identità cellulare e al rimodellamento dei programmi genici dello sviluppo. Un’espressione deregolata di **MSC** è stata riportata in diversi contesti biologici rilevanti per la malattia, supportandone l’uso come nodo per lo studio del ricalcablaggio trascrizionale e delle perturbazioni di via nelle cellule umane.

musculin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MSC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

musculin Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MSC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MSC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di musculin. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MSC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da musculin nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via musculin nelle cellule tumorali con espressione di MSC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.