MuRF1 Plasmide Double Nickase (m): sc-436648-NIC

Il gene murino Trim63 codifica MuRF1, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio RING finger specifica del muscolo, che regola la proteostasi indirizzando proteine miofibrillari e sarcomeriche verso la degradazione dipendente dall’ubiquitina. MuRF1 agisce all’interno del sistema ubiquitina–proteasoma e si interfaccia con vie che controllano il rimodellamento muscolare, il crosstalk tra autofagia e proteasoma e la segnalazione responsiva allo stress che determina la dimensione delle fibre e la composizione contrattile. L’alterazione dell’attività di Trim63/MuRF1 è comunemente studiata in contesti di atrofia del muscolo scheletrico e cardiaco, risposte a disuso o denervazione, deperimento associato a cachessia e rimodellamento legato a cardiomiopatie. In quanto regolatore nodale del catabolismo muscolare, MuRF1 rappresenta un punto d’ingresso geneticamente trattabile per analizzare i programmi trascrizionali e post-traduzionali che governano il mantenimento della massa muscolare.

MuRF1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Trim63 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Trim63. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Trim63. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Trim63 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.