Mucin 12/MUC12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400505-ACT

MUC12 codifica per la mucina 12, una mucina ancorata alla membrana e fortemente O-glicosilata, che contribuisce al glicocalice epiteliale e sostiene la funzione di barriera sulle superfici mucose. Modellando il microambiente pericellulare, MUC12 può influenzare le interazioni cellula–cellula e cellula–matrice, l’organizzazione della membrana apicale e le risposte agli stimoli infiammatori nel tratto gastrointestinale e in altri epiteli. Un’espressione e una glicosilazione delle mucine alterate sono spesso associate al rimodellamento epiteliale, a una differenziazione deregolata e a cambiamenti nei programmi di adesione e di segnalazione. Di conseguenza, MUC12 è studiato come marcatore e modulatore dipendente dal contesto nell’infiammazione mucosale e nei tumori epiteliali, includendo ricerche su come la biologia delle mucine influenzi le interazioni tra tumore e microambiente.

Mucin 12/MUC12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MUC12 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Mucin 12/MUC12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MUC12 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MUC12, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Mucin 12/MUC12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MUC12 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Mucin 12/MUC12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Mucin 12/MUC12 nelle cellule tumorali con espressione di MUC12 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.