Mucin 1/MUC1 Plasmide Double Nickase (h): sc-416876-NIC

MUC1 codifica la mucina 1, una mucina transmembrana di tipo I fortemente O-glicosilata, espressa sulla superficie apicale di molti tessuti epiteliali, dove contribuisce alla funzione di barriera, all’idratazione e alla protezione dallo stress ambientale. Attraverso la sua coda citoplasmatica, MUC1 interagisce con reti di segnalazione che regolano la polarità cellulare, l’adesione e le risposte trascrizionali, intersecando vie quali la segnalazione mediata da recettori tirosin-chinasici e i processi a valle associati a MAPK/PI3K. Alterazioni dell’espressione, della localizzazione o delle glicoforme di MUC1 sono spesso collegate a una disorganizzazione dell’epitelio e a interazioni immunitarie alterate in contesti infiammatori e neoplastici. Di conseguenza, MUC1 è ampiamente studiata come modulatore dell’omeostasi epiteliale, della biologia delle cellule tumorali e della segnalazione microambientale dipendente dalle mucine.

Mucin 1/MUC1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MUC1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MUC1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MUC1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MUC1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.