mTOR Plasmide Double Nickase (m): sc-425273-NIC

Il gene murino **Mtor** codifica la chinasi serina/treonina mTOR, un integratore principale della disponibilità di nutrienti, dello stato energetico, della tensione di ossigeno e della segnalazione dei fattori di crescita, che coordina crescita e metabolismo cellulari. Attraverso l’assemblaggio in mTORC1 e mTORC2, mTOR regola la sintesi proteica, l’autofagia, la biosintesi di lipidi e nucleotidi, la funzione mitocondriale e l’organizzazione del citoscheletro tramite effettori a valle quali S6K, 4E-BP1 e AKT. L’attività della via di mTOR influenza proliferazione, differenziamento e attivazione delle cellule immunitarie, collegando **Mtor** allo studio dei programmi di sviluppo e dell’omeostasi tissutale. Una segnalazione mTOR deregolata è ampiamente implicata nella biologia del cancro, nei fenotipi delle malattie metaboliche e nei meccanismi neuroevolutivi e neurodegenerativi, rendendola un nodo centrale per la dissezione delle vie di segnalazione nei modelli murini.

mTOR Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Mtor nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Mtor. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Mtor. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Mtor interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.