MN1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404347-ACT

MN1 (meningioma 1) codifica un co-regolatore trascrizionale che modula i programmi di espressione genica coinvolti nella differenziazione ematopoietica e nella proliferazione cellulare. MN1 interagisce con reti di recettori nucleari e coattivatori, influenzando il controllo trascrizionale associato alla cromatina e gli output trascrizionali specifici di linea. L’espressione deregolata di MN1 è fortemente associata alla biologia delle neoplasie mieloidi, in cui stati trascrizionali alterati contribuiscono al mantenimento aberrante dei progenitori e a una differenziazione compromessa. In quanto regolatore nucleare, MN1 è spesso studiato nel contesto di complessi di fattori di trascrizione e circuiti di regolazione genica che determinano le decisioni di destino cellulare.

MN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MN1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MN1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MN1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MN1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MN1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MN1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MN1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MN1 nelle cellule tumorali con espressione di MN1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.