MMP9 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400083-ACT

Il gene umano **MMP9** codifica la metalloproteinasi della matrice-9, un’endopeptidasi secreta zinco-dipendente che degrada componenti della matrice extracellulare, come il collagene di tipo IV, e regola il rimodellamento della membrana basale. La sua attività influenza la migrazione cellulare, l’angiogenesi e il traffico dei leucociti plasmando l’ambiente proteolitico pericellulare e liberando o attivando fattori di crescita e citochine legati alla matrice. **MMP9** è integrata nelle reti di segnalazione infiammatoria e nei programmi di organizzazione della matrice extracellulare, e interseca vie che controllano le dinamiche epitelio–mesenchimali e la riparazione tissutale. L’espressione e l’attività deregolate di **MMP9** sono spesso oggetto di studio nell’invasione e metastasi tumorale, nei disturbi infiammatori cronici, nel rimodellamento cardiovascolare e nella neuroinfiammazione.

MMP9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MMP9 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MMP9 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MMP9 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MMP9, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MMP9. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MMP9 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MMP9 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MMP9 nelle cellule tumorali con espressione di MMP9 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.